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　　丹皮酚對(duì)照品操作方法

　　

　?。?）薄層板制備

　　

　　市售薄層板臨用前一般應(yīng)在110℃活化30分鐘。聚酰胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據(jù)需要剪裁，但須注意剪裁后的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如在存放期間被空氣中雜質(zhì)污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶劑在展開(kāi)缸中上行展開(kāi)預(yù)洗，110℃活化，置干燥器中備用。

　　

　　自制薄層板除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水（或加有黏合劑的水溶液）在研缽中按同一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.2～0.3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干后，在110℃烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度，在反射光及透視光下檢視，表面應(yīng)均勻、平整、光滑，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染。

　　

　?。?）點(diǎn)樣除另有規(guī)定外，在沽凈干燥的環(huán)境，用毛細(xì)管或配合相應(yīng)的半自動(dòng)、自動(dòng)點(diǎn)樣器械點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀，點(diǎn)樣基線距底邊10～15mm，板一般基線離底邊8～10mm。圓點(diǎn)狀直徑一般不大于3mm，板一般不大于2mm；接觸點(diǎn)樣時(shí)注意勿損傷薄層表面。條帶狀寬度一般為5～10mm。板條帶寬度一般為4～8mm，可用半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣器械噴霧法點(diǎn)樣。點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以相鄰斑點(diǎn)互不干擾為宜，一般不少于8mm，板供試品間隔不少于5mm。

　　

　?。?）展開(kāi)將點(diǎn)好供試品的薄層板放入展開(kāi)缸中，浸入展開(kāi)劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜，密閉。除另有規(guī)定外，一般上行展開(kāi)8～15cm，薄層板上行展開(kāi)5～8cm。溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距，取出薄層板，晾干，待檢測(cè)。

　　

　　展開(kāi)前如需要溶劑蒸氣預(yù)平衡，可在展開(kāi)缸中加入適量的展開(kāi)劑，密閉，一般保持15～30分鐘。溶劑蒸氣預(yù)平衡后，應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板，立即密閉，展開(kāi)。如需使展開(kāi)缸達(dá)到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài)，則須在展開(kāi)缸的內(nèi)側(cè)放置與展開(kāi)缸內(nèi)徑同樣大小的濾紙，密閉一定時(shí)間，使達(dá)到飽和再如法展開(kāi)。必要時(shí)，可進(jìn)行二次展開(kāi)或雙向展開(kāi)。

　　

　?。?）顯色與檢視供試品含有可見(jiàn)光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在365nm紫外光燈下觀察熒光色譜。對(duì)于可見(jiàn)光下無(wú)色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板（如硅膠GF254板），在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜。

　　

　?。?）記錄薄層色譜圖像一般可采用攝像設(shè)備拍攝，以光學(xué)照片或電子圖像的形式保存。也可用薄層掃描儀掃描記錄相應(yīng)的色譜圖。

　　

　　丹皮酚對(duì)照品薄層色譜掃描法

　　

　　系指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中可吸收紫外光或可見(jiàn)光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于鑒別、檢查或含量測(cè)定。測(cè)定時(shí)可根據(jù)不同薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，按照規(guī)定方式掃描測(cè)定，一般選擇反射方式，采用吸收法或熒光法。除另有規(guī)定外，含量測(cè)定應(yīng)使用市售薄層板。

　　

　　掃描方法可采用單波長(zhǎng)掃描或雙波長(zhǎng)掃描。如采用雙波長(zhǎng)掃描，應(yīng)選用待測(cè)斑點(diǎn)無(wú)吸收或小吸收的波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)，供試品色譜中待測(cè)斑點(diǎn)的比移值（Rf值）和光譜掃描得到的吸收光譜圖或側(cè)得的光譜大吸收與小吸收應(yīng)與對(duì)照品相符，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。薄層掃描定量測(cè)定應(yīng)保證供試品斑點(diǎn)的量在線性范圍內(nèi)，必要時(shí)可適當(dāng)調(diào)攀供試品溶液的點(diǎn)樣量，供試品與對(duì)照品同板點(diǎn)樣、展開(kāi)、掃描、測(cè)定和計(jì)算。

　　

　　薄層色譜掃描用于含量測(cè)定時(shí)，通常采角線性回歸二點(diǎn)法計(jì)算，如線性范圍很窄時(shí)，可用多點(diǎn)法校正多項(xiàng)式回歸計(jì)算。供試品溶液和對(duì)照品溶液應(yīng)交叉點(diǎn)于同一薄層板上，供試品點(diǎn)樣不得少于2個(gè)，對(duì)照品每一濃度不得少于2個(gè)。掃描時(shí)，應(yīng)沿展開(kāi)方向掃描，不可橫向掃描。