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丹皮酚對(duì)照品的應(yīng)用制備的流程
更新時(shí)間:2018-10-25   點(diǎn)擊次數(shù):526次
   丹皮酚對(duì)照品的應(yīng)用制備的流程
  
  丹皮酚對(duì)照品操作方法
  
 ?。?)薄層板制備
  
  市售薄層板臨用前一般應(yīng)在110℃活化30分鐘。聚酰胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據(jù)需要剪裁,但須注意剪裁后的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如在存放期間被空氣中雜質(zhì)污染,使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶劑在展開(kāi)缸中上行展開(kāi)預(yù)洗,110℃活化,置干燥器中備用。
  
  自制薄層板除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水(或加有黏合劑的水溶液)在研缽中按同一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2~0.3mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺(tái)上于室溫下晾干后,在110℃烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度,在反射光及透視光下檢視,表面應(yīng)均勻、平整、光滑,無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染。
  
 ?。?)點(diǎn)樣除另有規(guī)定外,在沽凈干燥的環(huán)境,用毛細(xì)管或配合相應(yīng)的半自動(dòng)、自動(dòng)點(diǎn)樣器械點(diǎn)樣于薄層板上,一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀,點(diǎn)樣基線距底邊10~15mm,板一般基線離底邊8~10mm。圓點(diǎn)狀直徑一般不大于3mm,板一般不大于2mm;接觸點(diǎn)樣時(shí)注意勿損傷薄層表面。條帶狀寬度一般為5~10mm。板條帶寬度一般為4~8mm,可用半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣器械噴霧法點(diǎn)樣。點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以相鄰斑點(diǎn)互不干擾為宜,一般不少于8mm,板供試品間隔不少于5mm。
  
 ?。?)展開(kāi)將點(diǎn)好供試品的薄層板放入展開(kāi)缸中,浸入展開(kāi)劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜,密閉。除另有規(guī)定外,一般上行展開(kāi)8~15cm,薄層板上行展開(kāi)5~8cm。溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距,取出薄層板,晾干,待檢測(cè)。
  
  展開(kāi)前如需要溶劑蒸氣預(yù)平衡,可在展開(kāi)缸中加入適量的展開(kāi)劑,密閉,一般保持15~30分鐘。溶劑蒸氣預(yù)平衡后,應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板,立即密閉,展開(kāi)。如需使展開(kāi)缸達(dá)到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài),則須在展開(kāi)缸的內(nèi)側(cè)放置與展開(kāi)缸內(nèi)徑同樣大小的濾紙,密閉一定時(shí)間,使達(dá)到飽和再如法展開(kāi)。必要時(shí),可進(jìn)行二次展開(kāi)或雙向展開(kāi)。
  
 ?。?)顯色與檢視供試品含有可見(jiàn)光下有顏色的成分可直接在日光下檢視,也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色,或加熱顯色,在日光下檢視。有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在365nm紫外光燈下觀察熒光色譜。對(duì)于可見(jiàn)光下無(wú)色,但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板(如硅膠GF254板),在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜。
  
 ?。?)記錄薄層色譜圖像一般可采用攝像設(shè)備拍攝,以光學(xué)照片或電子圖像的形式保存。也可用薄層掃描儀掃描記錄相應(yīng)的色譜圖。
  
  丹皮酚對(duì)照品薄層色譜掃描法
  
  系指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上,對(duì)薄層色譜中可吸收紫外光或可見(jiàn)光的斑點(diǎn),或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描,將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于鑒別、檢查或含量測(cè)定。測(cè)定時(shí)可根據(jù)不同薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),按照規(guī)定方式掃描測(cè)定,一般選擇反射方式,采用吸收法或熒光法。除另有規(guī)定外,含量測(cè)定應(yīng)使用市售薄層板。
  
  掃描方法可采用單波長(zhǎng)掃描或雙波長(zhǎng)掃描。如采用雙波長(zhǎng)掃描,應(yīng)選用待測(cè)斑點(diǎn)無(wú)吸收或小吸收的波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng),供試品色譜中待測(cè)斑點(diǎn)的比移值(Rf值)和光譜掃描得到的吸收光譜圖或側(cè)得的光譜大吸收與小吸收應(yīng)與對(duì)照品相符,以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。薄層掃描定量測(cè)定應(yīng)保證供試品斑點(diǎn)的量在線性范圍內(nèi),必要時(shí)可適當(dāng)調(diào)攀供試品溶液的點(diǎn)樣量,供試品與對(duì)照品同板點(diǎn)樣、展開(kāi)、掃描、測(cè)定和計(jì)算。
  
  薄層色譜掃描用于含量測(cè)定時(shí),通常采角線性回歸二點(diǎn)法計(jì)算,如線性范圍很窄時(shí),可用多點(diǎn)法校正多項(xiàng)式回歸計(jì)算。供試品溶液和對(duì)照品溶液應(yīng)交叉點(diǎn)于同一薄層板上,供試品點(diǎn)樣不得少于2個(gè),對(duì)照品每一濃度不得少于2個(gè)。掃描時(shí),應(yīng)沿展開(kāi)方向掃描,不可橫向掃描。
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