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ELISA檢測(cè)，按照試劑說(shuō)明書(shū)要求，每次試驗(yàn)、每塊扳上都要設(shè)置以下3項(xiàng)對(duì)照：
1.空白對(duì)照：僅用稀釋液代替檢測(cè)樣本、用以觀測(cè)zui終反應(yīng)的顯色“本底”、并用于酶標(biāo)儀消除、扣除“本底”， 或者，在計(jì)算陰性對(duì)照均值(NCx)、陽(yáng)性對(duì)照均值(PCx)、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時(shí)減去空白對(duì)照的本底吸光值。 空白孔具體如何讀取讀數(shù)，則依照說(shuō)明書(shū)操作。 如：以空氣讀空白(不放板架和板條)，在450nm(單波長(zhǎng))、或450nm和620—700mn(底物是TMB)參考波長(zhǎng)進(jìn)行讀數(shù)。
2.陰性對(duì)照(品)：
(1)陰性對(duì)照(品)的概念與要求：所謂陰性對(duì)照(品)，應(yīng)當(dāng)是本項(xiàng)檢測(cè)試驗(yàn)中采用與待撿物(樣品、人的血清等)具有同源性和同質(zhì)性，又不含有待檢物質(zhì)，并能客觀比較和鑒別處理因素(血清免疫學(xué)試驗(yàn)中有特異性抗原與抗體反應(yīng))之間的差異。因此，用動(dòng)物血清或其制品(如牛血清白蛋白等)代替陰性人血清作為對(duì)照品，從理論和實(shí)踐上都是不可取的，弊端甚多，無(wú)須細(xì)述。 陰性對(duì)照讀數(shù)，并非是“越低越好”。NCx值接近0.00X水平，這是假象!試想一下，真正采用“陰性人血清”的陰性對(duì)照品，NCx值會(huì)如此之低嗎? 一個(gè)題外插曲：表明ELISA試劑內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)重要統(tǒng)計(jì)標(biāo)志，就是要看：陰性樣本的的上限不應(yīng)當(dāng)大于、必須小于C.O.I.=1.00;反之，陽(yáng)性樣本的的下限不可小于、應(yīng)當(dāng)大于C.O.I.=1.00! 這里如此細(xì)說(shuō)NCx是因?yàn)镹Cx值在Cut off值計(jì)算中是相當(dāng)舉足輕重的。
(2)陰性對(duì)照(品)分為兩類
一是代表受檢人血清中并不含有、或方法學(xué)靈敏度未能檢出的待檢物的基準(zhǔn)水平，并且是結(jié)果判斷值(Cut off)計(jì)算式中決定“是”(陽(yáng)性)、或“否”(陰性)的可變值。陰性對(duì)照值高，導(dǎo)致假陰性;反之，導(dǎo)致假陽(yáng)性。 二是陰性對(duì)照設(shè)置，在方法學(xué)上要求加入指示性定量標(biāo)準(zhǔn)品，或者，選取代表平均水平的正常人血清用作陰性對(duì)照。此類Cut off 值計(jì)算時(shí)，多數(shù)均包括陰性和陽(yáng)性對(duì)照值2個(gè)可變值。
3.陽(yáng)性對(duì)照(品)：
(1)陽(yáng)性對(duì)照(品)的概念與要求：同陰性對(duì)照(品)，只是采用“精選”的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成。所謂“精選”，就是把收集的陽(yáng)性人血清經(jīng)過(guò)數(shù)種試驗(yàn)進(jìn)行“篩試”、把含有“干擾性物質(zhì)”的血清剔除、不用，以避免出現(xiàn)“假陽(yáng)性”干擾試驗(yàn)結(jié)果。
(2)陽(yáng)性對(duì)照(品)設(shè)置，也可區(qū)分為兩種類型與用途：
一是陽(yáng)性對(duì)照主要用于評(píng)價(jià)該項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果是否有效和試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性。而所設(shè)的陽(yáng)性對(duì)照的測(cè)量值不列入Cut off值計(jì)算、但是不可不做。 二是陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置，不僅用于評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果是否有效和試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性，而且計(jì)入Cut off的計(jì)算。此時(shí)的Cut off值的含義是代表該標(biāo)志物在健康(正常)人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測(cè)值超過(guò)該上限(Cut off)時(shí)表示有診斷意義。
陽(yáng)性與陰性灰?guī)?/strong>
此處所指陽(yáng)性與陰性灰?guī)?，既是試劑本身的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，也是判斷待檢樣本中是否有需要重復(fù)復(fù)檢的可疑樣本范圍(Sample Retest Range)，及各批/次試驗(yàn)時(shí)可疑樣本占有率。
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