對(duì)于不同菌種的復(fù)蘇及保存活化的方式
更新時(shí)間：2021-08-17 點(diǎn)擊次數(shù)：2900次
菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過程，因?yàn)楸４鏁r(shí)的條件往往和培養(yǎng)時(shí)的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境
要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏的方式和方法。目前國際國內(nèi)常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃ 冰箱凍結(jié)法、液氮超低溫凍結(jié)法。
對(duì)于不同的保存方式活化的方式也不同：
1 定期移植法的菌種復(fù)蘇較簡單，直接轉(zhuǎn)接即可；
2 液體石蠟法保存的菌種在復(fù)蘇時(shí)，挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上，生長繁殖后，再重新轉(zhuǎn)接一次；
3 沙土管法保存菌種在復(fù)蘇時(shí)，在無菌條件下打開沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養(yǎng)基上，長出菌落后再轉(zhuǎn)接一次?；蛉∩惩亮Ｓ谶m宜的液體培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接斜面；
4 真空冷凍干燥法保存菌種在復(fù)蘇時(shí)先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，將安瓿管頂部燒熱， 用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端，用無菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上，進(jìn)行適溫培養(yǎng)；
5 -80℃ 冰箱凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇時(shí)，從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置38℃-40℃水浴中快速復(fù)蘇并適當(dāng)快速搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)
6 液氮超低溫凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇與-80℃ 冰箱凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇相似，從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置在38℃-40℃水浴中快速復(fù)蘇并適當(dāng)搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。
總結(jié)一下菌種活化需要以下幾個(gè)步驟：第一配置菌種適宜生長的培養(yǎng)基,第二將菌種從保藏狀態(tài)恢復(fù)到室溫狀態(tài)，比如將冷凍的菌種解凍,第三將通過操作將保藏的菌種接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此步驟稱為菌種復(fù)壯,第四步挑選培養(yǎng)基茁壯的菌落，挑選其中部分菌落接種到新的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，重復(fù)此步驟2-3次，從而得到生長良好的菌落,經(jīng)過這四個(gè)步驟就到達(dá)將菌種從保藏狀態(tài)活化的目的.
復(fù)蘇菌種前應(yīng)準(zhǔn)各適于該菌種生長的固體、液體培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備，所有操作均應(yīng)在符合生物安全保護(hù)及無菌條件下進(jìn)行。啟開菌種宜采用鋸開法(鋸開前用70%酒精棉消毒菌種管外壁)。用吸管將液體培養(yǎng)基0.3ml左右注入被啟開的菌種安瓶中并吹打，使安瓶中的凍干菌種溶解成菌懸液。 將上述菌懸液全部吸出，分別接種到固體斜面和液體培養(yǎng)管中，一般放置在37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18~24小時(shí)。對(duì)需要特殊培養(yǎng)條件的細(xì)菌，如需5%~10%CO2或厭氧條件等，應(yīng)分別于CO2培養(yǎng)箱或厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。次日觀察菌種的生長情況，如菌種未生長，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至72小時(shí)。復(fù)蘇后的菌種在傳1~2代后使用。暫不啟開的安瓶及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。
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