枯草芽孢桿菌革蘭氏如何染色和如何檢測(cè)的步驟
更新時(shí)間:2021-09-07 點(diǎn)擊次數(shù):15146次
枯草芽孢桿菌革蘭氏染色的具體步驟如下:
1、首先就是涂片:將培養(yǎng)14-16小時(shí)的枯草芽孢桿菌涂片(注意期間涂片切不可過(guò)于濃厚),干燥、固定。固定時(shí)通過(guò)火焰1-2次即可,不可過(guò)熱,以載玻片不燙手為宜。
2.染色:(1)初染 加草酸銨結(jié)晶紫一滴,約一分鐘,水洗。(2)媒染 滴加碘液沖去殘水,并覆蓋約一分鐘,水洗。(3)脫色 將載玻片上面的水甩凈,并襯以白背景,用95%酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現(xiàn)紫色時(shí)為止,約20-30秒鐘,立即用水沖洗酒精。(4)復(fù)染 用番紅液染1-2分鐘,水洗,吸干水分。(5)鏡檢 干燥后,置油鏡觀察。革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。
革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度,如果脫色過(guò)度,陽(yáng)性菌可被誤染為陰性菌,而脫色不夠,陰性菌可被誤染為陽(yáng)性菌。除此以外,菌齡也影響染色結(jié)果,如陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈陰性反應(yīng)。atcc菌種購(gòu)買
革蘭氏染色法鑒定枯草芽孢桿菌
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆崭锾m氏染色技術(shù)
二、基本原理:染色的基本步驟是:結(jié)晶紫初染,碘液媒染,乙醇脫色,番紅復(fù)染。經(jīng)染色后,保留初染劑藍(lán)紫色的為革蘭陽(yáng)性菌,染上復(fù)染劑顏色(紅色)的為陰性菌。革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁的肽聚糖為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),壁厚,類脂含量低,乙醇脫色時(shí)細(xì)胞壁脫水、肽聚糖層網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小,透性降低,使結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物不宜被洗脫保留在細(xì)胞內(nèi),復(fù)染后仍保留初染劑的藍(lán)紫色。陰性菌肽聚糖層較薄,類脂含量高,脫色時(shí),類脂溶解,細(xì)胞壁透性增大,使結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物較易被洗脫,復(fù)染后,染上復(fù)染劑的紅色。
三、器材:培養(yǎng)48h枯草芽孢桿菌菌落革蘭氏染色液
四、操作步驟:1.制片常規(guī)涂片、干燥、固定2.初染結(jié)晶紫1min,水洗。3.媒染碘液1min,水洗。4.脫色95%酒精流加至洗出液無(wú)紫色,立即水洗5.復(fù)染番紅復(fù)染約2min,水洗。6.鏡檢先低倍找到要觀察區(qū)域,再高倍找到合適的視野,最后觀察7.油鏡的清洗及載玻片清洗。