每一種微生物都有其特殊的生物學特性，細菌在適宜的生長條件下，在特定的培養(yǎng)基中有其特征性的生長表現(xiàn)，可作為鑒定細菌種類的依據(jù)。
[目的要求]
(1)了解細菌的菌落形態(tài)及其在各種培養(yǎng)基上的生長表現(xiàn)。
(2)了解培養(yǎng)性狀對細菌鑒別的重要意義。
(3)掌握檢查細菌運動力的幾種方法。
(4)區(qū)別細菌的真正運動和受外力作用的擺動或移動。
[實驗材料]
(1)葡萄球菌、炭疽桿菌、巴氏桿菌、豬丹毒桿菌的普通平板或鮮血(血清)平板、斜面、瓊脂穿刺及明膠穿刺培養(yǎng)物。
(2)馬鏈球菌馬亞種、綠膿桿菌、葡萄球菌、大腸桿菌(Escherichia coli)、炭疽桿菌的肉湯培養(yǎng)物，厭氧梭菌的熟肉培養(yǎng)基培養(yǎng)物。
(3)大腸桿菌(Escherichia coli)、葡萄球菌的半固體穿刺培養(yǎng)物。
(4)凹玻片、凡士林等。
[細菌在固體培養(yǎng)基上的生長表現(xiàn)]
1．瓊脂平板上的生長表現(xiàn)細菌在固體培養(yǎng)基表面生長繁殖，可形成肉眼可見的菌落。各種細菌的菌落，按其特征的不同，可以在一定程度上進行鑒別。例如，葡萄球菌在瓊脂平皿上，由于產(chǎn)生色素的不同，形成各種顏色的圓形而突起的菌落；炭疽桿菌形成扁平、干燥、邊緣不整齊的波紋狀菌落，用放大鏡觀察時，呈卷發(fā)樣；腸道桿菌屬的細菌，形成圓形、濕潤、黏稠、扁平、大小不等之菌落；巴氏桿菌和豬丹毒桿菌，形成細小露珠狀菌落。菌落的觀察方法除肉眼外，可用放大鏡，必要時也可用低倍顯微鏡進行檢查。觀察的主要內(nèi)容有：
大小菌落的大小，規(guī)定用毫米(mm)表示，一般不足1mm者為露滴狀菌落，1～2mm者為小菌落；2～4mm者為中等大菌落；4～6mm或更大者稱為大菌落、巨大菌落。
形狀菌落的外形有圓形、不正形、根足形、葡萄葉形。
邊緣菌落邊緣有整齊、鋸齒狀、網(wǎng)狀、樹葉狀、蟲蝕狀、放射狀等。
表面性狀觀察其表面平滑、粗糙、皺襞狀、旋渦狀、荷包蛋狀，甚至有子菌落等(圖6-1)。
隆起度表面有隆起、輕度隆起、中央隆起，也有陷凹或堤狀者(圖6—2)。
顏色及透明度菌落有無色、灰白色，有的能產(chǎn)生各種色素；菌落是否光澤、透明、
透明及不透明。
硬度黏液狀、膜狀、干燥或濕潤等。
溶血若是鮮血瓊脂平皿，應看其是否溶血，溶血情況怎樣。
2．瓊脂斜面上生長表現(xiàn)將各種細菌分別以接種針直線接種于瓊脂斜面上(自底部向上劃一直線)，培養(yǎng)后觀察其生長表現(xiàn)，如圖6—3所示各種生長方式。
3．瓊脂柱穿刺培養(yǎng)中的生長表現(xiàn)將各種細菌分別以接種針穿刺接種于瓊脂柱中，培養(yǎng)后觀察其生長表現(xiàn)，如圖6—4所示各種生長方式。
[細菌在明膠穿刺培養(yǎng)中的生長表現(xiàn)]
取大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草桿菌和其他多種細菌分別以接種針穿刺接種于明膠柱，置22℃溫箱中培養(yǎng)后觀察其液化與否和液化的情況。細菌對明膠柱的液化作用，其形式如圖6—5所示。
[細菌在液體培養(yǎng)基中的生長表現(xiàn)]
1．肉湯中生長表現(xiàn)將馬鏈球菌馬亞種、綠膿桿菌、葡萄球菌、大腸桿菌(Escherichia coli)、炭疽桿菌等分別接種于肉湯中，培養(yǎng)后觀察其生長情況，注意其混圖6—5細菌明膠柱穿刺培養(yǎng)生長表現(xiàn)濁度、沉淀物、菌膜、菌環(huán)和顏色等(圖6—6)。
細菌在肉湯中所形成的沉淀有：顆粒狀沉淀、黏稠沉淀、絮狀沉淀、小塊狀沉淀。另外還有不生成沉淀的菌種。
2．細菌在熟肉培養(yǎng)基中生長表現(xiàn)取各種厭氧梭菌分別接種于熟肉培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后觀察其生長表現(xiàn)，注意其混濁度、沉淀、碎肉的顏色和碎肉塊被消化的情況。
[細菌運動力的檢查]
1．顯微鏡直接檢查法一部分細菌具有運動能力，可以獨立運動；另一些細菌則沒有運動的性能。在顯微鏡下觀察，細菌的真正運動(自動運動)表現(xiàn)為能離開原來位置，不斷改變方向的自由地游動。水的分子運動(布朗運動)也能見于細菌個體，使其在原地擺動，但不能遠離原來位置移動。這種情況，都是外力作用的結果，不是細菌本身的真正運動。檢查細菌的運動力，應用幼年培養(yǎng)物，最好剛從溫箱中取出，并在溫暖的環(huán)境下從速進行。
懸滴檢查法
制片：取潔凈的凹玻片一塊，于其凹窩的四周整齊地涂以適量的凡士林。另取潔凈蓋玻片一塊，用接種環(huán)于其中央滴上一小滴生理鹽水或透明肉湯，再用接種環(huán)取待檢固體培養(yǎng)物少量(不要過多)，混勻于液滴內(nèi)；如為液體檢材，可直接用接種環(huán)取一滴于蓋玻片上，取起并翻轉蓋玻片，使液滴向下，以其對角線垂直于載玻片四邊的位置，輕輕蓋在凹玻片的凹窩上，略加輕壓，使蓋玻片四周與凡士林密著，封閉凹窩，即可進行鏡檢(或者將載玻片取起翻轉，使凹窩對正蓋玻片上液滴罩下，輕壓，使與凡士林密著，封閉凹窩，并粘著蓋玻片，然后再將玻片一起翻轉，即可進行鏡檢)。
用凡士林封閉凹窩的主要目的，在于防止液滴干燥，可供較長時間觀察；而使蓋玻片如上述位置放置，則便于放上和取下，如用蠟筆劃好分格，則可在一塊蓋玻片上作2～3個懸滴點(如只作短時間觀察，亦可不用凡土林，而在凹窩四周以水濕潤，甚至水也不用，光是蓋上蓋玻片即用)，如圖（6-7）所示。
鏡檢：顯微鏡要放在平坦、穩(wěn)固之處，不能傾斜或震動，放上懸滴標本片后，先用低倍鏡找到液滴，移至視野中央，然后轉換高倍鏡和調整光線(宜稍暗)，對焦觀察，一般不必使用油鏡觀察，必須用時，注意防止壓壞蓋玻片。
壓滴檢查法本法比較簡便，宜于短時觀察，也較適用于混濁或濃厚的液體檢材(如血液、滲出液、膿汁、稀糞便等)。
制片：取一塊潔凈的普通載玻片，于其中央滴上一滴(可以稍大些)生理鹽水，以接種環(huán)取少量固體檢材混勻其中。如為液體檢材，可以直接滴在載玻片上，然后取一個潔凈的蓋玻片，輕輕蓋壓在液滴上，要注意避免產(chǎn)生氣泡。
鏡檢：同懸滴檢查法。
暗視野檢查法
制片：與壓滴檢查法同，但只能應用不超過1.5mm厚度的薄載玻片，否則暗視野集光器的斜射光交點，將不能調整至標本液滴中，而只能落在下面(載玻片內(nèi))，這就不能觀察運動標本的影像。
鏡檢：暗視野鏡檢方法見實驗一。
2．培養(yǎng)檢查法
(1)半固體培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)法：以滅菌接種針蘸取純培養(yǎng)檢材，垂直刺進半固體培養(yǎng)基的瓊脂柱中間直至管底，置37℃溫箱中培養(yǎng)18～24h，四周擴散生長，使周圍的培養(yǎng)基變成混濁；無運動力的細菌僅能沿穿刺線生長，周圍的培養(yǎng)基仍然保持澄清(圖6—8)。
(2)平板挖溝培養(yǎng)法：預先制備好鮮血瓊脂平板，以無菌手術在平板中央挖去一條lcm寬的瓊脂條，形成一條小溝，放置一條4cm×0.5cm的無菌濾紙橫跨于兩邊培養(yǎng)基上，使之與小溝相垂直。在濾紙條的一頂端接種待檢細菌的純培養(yǎng)物，置37℃溫箱中培養(yǎng)，每天觀察生長情況，直至7天，如接種端的隔溝對邊亦生長同樣細菌，表示該菌有運動力。
[細菌大小的測定]
測量細菌的大小，以微米(μm)為單位，1μm = 1/1000mm。測量細菌大小的裝置稱為測微計，它由接目測微尺和接物測微計兩部分組成。
1．接目測微尺為一個圓形玻片，其中央部刻有50～100個等分小格，小格的長度不定，隨接目鏡與接物鏡的放大倍數(shù)不同而異。因此在測量細菌大小之前，須應用接物測微計來確定每一小格的長度。使用時將接目測微尺裝入接目的鏡筒內(nèi)。
2．接物測微計為一載玻片，在玻片的中央，粘著一圓形小玻片，在其上刻有100個小格，每一小格的長度為10μm，所以全長為1mm(1 000μm)。
3．測量法先用低倍鏡找到接物測微計的小格，然后換油鏡使接目測微尺與接物測微計的小格重疊。借以求出接目測微尺中一個小格的絕對值。
例如接目測定微尺的7小格與接物測微計的一小格重疊時，則接目測微尺一小格的值為7：10：1：X，X=1.43，即一小格為1.43μm。
然后取下接物測微計，放在欲測大腸桿菌(Escherichia coli)染色標本。檢查標本上的細菌的長、寬相當于接目測微計上的幾小格，即為細菌體的大小。
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