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　　噻唑藍標準品用途常用于基于MTT檢測方法的細胞活力、細胞增殖或細胞毒性檢測。因為MTT具有正電荷,它可以穿過細胞膜并被線粒體還原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有機溶劑。脫氫酶的檢測,染色法。

　　MTT，商品名稱噻唑藍

　　全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide漢語化學名為3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，一種黃顏色的染料，由于應用于細胞存活率的檢測而被熟知。在細胞培養(yǎng)中，MTT不僅僅是一個化學物品，更是一種實驗方法。

　　MTT原理

　　MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚，用酶標儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。

　　噻唑藍標準品的實驗步驟：

　　1：接種細胞：用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul.

　　2:培養(yǎng)細胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間)。

　　3：呈色：培養(yǎng)3-5天后，每孔加溶液(5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.繼續(xù)孵育4h

　　終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ulDMSO，振蕩10min，使結晶物充分融解。

　　4：比色：選擇490nm波長，在酶標儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。