掌握培養(yǎng)基制備、滅菌及無菌檢測技術(shù)的過程和方法
更新時間：2024-04-15 點擊次數(shù)：148次
一、實驗?zāi)康?/span>
1.了解培養(yǎng)基的配置原理
2.掌握其制備過程和方法
二、實驗原理
培養(yǎng)基是人們按照不同微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的需要而配置的營養(yǎng)基質(zhì)。用于微生物的分離純化培養(yǎng)鑒定和保存菌種。培養(yǎng)基的種類有很多，按對培養(yǎng)基的組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解可以分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。按照不同微生物對營養(yǎng)的要求，選擇可被迅速利用的碳源、氮源、無機(jī)鹽及其他營養(yǎng)成分可制成不同的培養(yǎng)基。
三、實驗器材
1.牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、NaCI、K2HPO4、KNO3、MgSO4FeSO4馬鈴、蔗糖、瓊脂、10%NaOH和10%HCI。
2.刻度搪瓷杯、天平、牛角匙、小燒杯、稱量紙、分裝漏斗、試管、棉花、鐵絲筐、電爐、玻棒、紗布。
四、實驗操作
1.稱量：按照培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱取各種成分。
?。?）牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基
牛肉膏 3克 蛋白胨 5克
NaCl 5克 瓊脂15-20克
水 1000毫升
PH調(diào)至7.2-7.4 0.1MPa壓力下滅菌30分鐘
（2）馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）
馬鈴薯 200克 蔗糖(白糖) 20克
瓊脂 15-20克 水1000毫升
去皮洗凈的馬鈴薯按量稱取，切成小塊，放在水中煮沸，并維持20一30分鐘，用雙層紗布過濾得馬鈴薯汁，補足到定量的水。自然pH值0.1MPa壓力下滅菌30分鐘。
?。?）高氏一號培養(yǎng)基
可溶性淀粉 20克 KNO3 1克 K2HPO4'3H2O 0.5克 NaCl 0.5克 MgSO4'7H2O 0.5克 FeSO4'7H2O
pH調(diào)至7.2~~7.4先用少量的水將淀粉調(diào)成糊狀后再加水和其他的鹽類。0.1MPa壓力下滅菌30分鐘
2.溶化：
依配方順序，用少量的水溶解各成分，有時需加熱溶化，最后補足所需水量。在暴沸時添加少量的水抑制沸騰，融化過程需不斷攪拌。
3.調(diào)整pH：
用PH試紙或酸酸度計先試測初制備培養(yǎng)基的的PH值，然后用10%NaOH或10%HCⅠ調(diào)整至所需的pH范圍。
4.過濾：
在配制固體培養(yǎng)基時，事先將瓊脂稱好用冷水浸泡，洗凈擠干后加人液體培養(yǎng)基中，瓊脂融化的過程中，需不斷攪拌，并控制火力，不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦，待*融化后，補足水分。
5.分裝：根據(jù)不同的需要，可將配制的培養(yǎng)基分裝在試管或三角瓶內(nèi)，注意不要將培養(yǎng)基沾染在管口和瓶口上，以免粘住棉塞，引起污染。
6.裝棉塞或硅晈塞，棉塞粗細(xì)、長短要求合適，外面再包一層報紙避免造成污染。
7.滅菌：
培養(yǎng)基的滅菌時間和溫度，需按各種規(guī)定進(jìn)行，保證滅菌數(shù)果和不損失培養(yǎng)基的必要成分。滅菌后的培養(yǎng)基要趁熱擺成斜面，半固體要垂直放置，待冷卻即可成為斜面培養(yǎng)基和半固體深層瓊脂培養(yǎng)基，而且必須放在37℃溫箱培養(yǎng)24小時，無菌生長方可使用。
五、注意事項
1.牛肉膏的稱?。?/span>
用玻璃棒蘸取適量牛肉膏，抹于稱量紙上，勿取過量，不足時，再蘸取少量，逐步添加；然后將牛肉膏連同稱量紙放入水中，稍等片刻牛肉膏即從稱量紙上脫落，用玻璃棒將紙撈出即可。
2.加瓊脂：
瓊脂一般應(yīng)在調(diào)好了pH后加入，瓊脂的加入不會影響pH，加入瓊脂后要控制火力并不斷攪拌，以免沸騰溢出或瓊脂糊底燒焦。加熱過程中因水分蒸發(fā)而可能使體積減小，應(yīng)補充水分至所需量。
3.滅菌前一定要用報紙包扎好。
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