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噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的化學(xué)性質(zhì)及用于實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)步驟
更新時(shí)間:2019-04-12   點(diǎn)擊次數(shù):744次
   噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的化學(xué)性質(zhì)及用于實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)步驟
  噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的特點(diǎn)是:
  1.顯著減少檢測(cè)溶液所需的研制時(shí)間和成本
  2.確保產(chǎn)品一致性
  3.產(chǎn)品按照藥典相關(guān)需求制作
  4.按照受控流程和批量認(rèn)證的需求制造以確保批與批之間的一致性以及結(jié)果的重現(xiàn)性
  噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的化學(xué)性質(zhì)
  黃色或橙黃色粉末,熔點(diǎn):195℃(分解)。微溶于甲醇中,但難溶于水或乙醇中。用醚、丙酮或乙酸乙酯也不能將其*溶解。溶于DMSO中。常配制成5mg/ml的儲(chǔ)備液。
  噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的分子結(jié)構(gòu)式
  性狀微溶于甲醇中,但難溶于水或乙醇中。用醚、丙酮或乙酸乙酯也不能將其*溶解。195℃溶于水或DMSO。常配制成5mg/ml的儲(chǔ)備液。
  貯存2-8℃避光保存。
  用途常用于基于MTT檢測(cè)方法的細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性檢測(cè)。因?yàn)镸TT具有正電荷,它可以穿過(guò)細(xì)胞膜并被線粒體還原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有機(jī)溶劑。脫氫酶的檢測(cè),染色法。
  噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)步驟:
  1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
  2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃反應(yīng)60分鐘。
  3.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
  4.每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液)100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
  5.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
  6.依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
  7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
  8.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。第二抗體是能和抗體結(jié)合的,即抗體的抗體。主要用于檢測(cè)抗體的存在。因?yàn)樵谶@個(gè)時(shí)期各種雜交瘤細(xì)胞同時(shí)旺盛生長(zhǎng),互相爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)和空間,而產(chǎn)生抗體的細(xì)胞有被淹沒和淘汰的可能。
  以上便是今天關(guān)于噻唑藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的化學(xué)性質(zhì)及用于實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)步驟的全部分享了,希望對(duì)大家今后使用本設(shè)備能有幫助。
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