噻唑藍標準品用途及試驗步驟介紹
更新時間：2020-09-18 點擊次數(shù)：767次
噻唑藍標準品常用于基于MTT檢測方法的細胞活力、細胞增殖或細胞毒性檢測。因為MTT具有正電荷，它可以穿過細胞膜并被線粒體還原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有機溶劑。
噻唑藍標準品用途：
1.藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對體外培養(yǎng)的細胞毒性的測定;
2.細胞增殖及細胞活性測定。檢測原理如上所述，根據(jù)測得的吸光度值(OD值)，來判斷活細胞數(shù)量，OD值越大，細胞活性越強(如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越小)。
實驗步驟：
1：接種細胞：用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul.
2:培養(yǎng)細胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間)。
3：呈色：培養(yǎng)3-5天后，每孔加噻唑藍標準品溶液(5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.繼續(xù)孵育4h
終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ulDMSO，振蕩10min，使結(jié)晶物充分融解。
4：比色：選擇490nm波長，在酶標儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。
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