噻唑藍標準品正確的實驗步驟分析
更新時間：2022-12-25 點擊次數(shù)：401次
噻唑藍標準品是一種黃色或橙黃色粉末，熔點：195℃(分解）。微溶于甲醇中，但難溶于水或乙醇中。用醚、丙酮或乙酸乙酯也不能將其溶解。溶于DMSO中。常配制成5mg/ml的儲備液。
噻唑藍標準品的實驗步驟：
1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜,37℃反應60分鐘。
3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
4.每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液）100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進行檢測。第二抗體是能和抗體結合的，即抗體的抗體。主要用于檢測抗體的存在。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養(yǎng)和空間，而產(chǎn)生抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。
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