菌種的活化就是將處于保藏狀態(tài)的菌種放入合適的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，逐級(jí)增大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，可以理解為就是為了獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物進(jìn)行培養(yǎng)。菌種發(fā)酵一般情況下需要2-3代的復(fù)壯過(guò)程，因?yàn)楸４鏁r(shí)的條件往往和培養(yǎng)時(shí)的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境
中藥標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品研究中心建議實(shí)驗(yàn)要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏的方式和方法。目前國(guó)際和國(guó)內(nèi)常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃ 冰箱凍結(jié)法、液氮超低溫凍結(jié)法。
對(duì)于不同的保存方式活化的方式也不同：
1 定期移植法的菌種復(fù)蘇較簡(jiǎn)單，直接轉(zhuǎn)接即可；
2 液體石蠟法保存的菌種在復(fù)蘇時(shí)，挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上，生長(zhǎng)繁殖后，再重新轉(zhuǎn)接一次；
3 沙土管法保存菌種在復(fù)蘇時(shí)，在無(wú)菌條件下打開(kāi)沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出菌落后再轉(zhuǎn)接一次?；蛉∩惩亮Ｓ谶m宜的液體培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接斜面；
4 真空冷凍干燥法保存菌種在復(fù)蘇時(shí)先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，將安瓿管頂部燒熱， 用無(wú)菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端，用無(wú)菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊，使用無(wú)菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上，進(jìn)行適溫培養(yǎng)；
5 -80℃ 冰箱凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇時(shí)，從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置38℃-40℃水浴中快速?gòu)?fù)蘇并適當(dāng)快速搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，約需50秒-100秒。開(kāi)啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)
6 液氮超低溫凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇與-80℃ 冰箱凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇相似，從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置在38℃-40℃水浴中快速?gòu)?fù)蘇并適當(dāng)搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開(kāi)啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。
總結(jié)一下菌種活化需要以下幾個(gè)步驟：
第一配置菌種適宜生長(zhǎng)的培養(yǎng)基
第二將菌種從保藏狀態(tài)恢復(fù)到室溫狀態(tài)，比如將冷凍的菌種解凍
第三將通過(guò)操作將保藏的菌種接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此步驟稱(chēng)為菌種復(fù)壯
第四步挑選培養(yǎng)基茁壯的菌落，挑選其中部分菌落接種到新的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，重復(fù)此步驟2-3次，從而得到生長(zhǎng)良好的菌落經(jīng)過(guò)這四個(gè)步驟就到達(dá)將菌種從保藏狀態(tài)活化的最終目的. 舉例大腸桿菌菌種活化方法：配活化培養(yǎng)基（LB）： 活化大腸桿菌配方：0.5g酵母粉，1g蛋白胨，1g氯化鈉，稀釋到100ml復(fù)蘇細(xì)胞（去掉DMSO及冷凍過(guò)程中產(chǎn)生的有毒物質(zhì)）
材料：液氮中的細(xì)胞共1毫升：含20%血清（FBS），10%DMSO（防止細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生冰晶），培養(yǎng)基
步驟：一、從液氮（約-190度）中取出細(xì)胞（管中有1ml細(xì)胞）（稍微抖掉液體）二、快速放入37度水浴1分鐘。三、加入1ml DMEM 培養(yǎng)基融化冰晶。四、全部移入離心管中，管口封口膜封口；五、離心：1200r/min，5min。六、去上清（用大槍?zhuān)?-5ml）一次吸出，吸時(shí)沉淀朝上）；G2 細(xì)胞沉淀較明顯
七、先（用1ml 小槍?zhuān)┘拥诫x心管中1 ml培養(yǎng)基并吹打吸出到培養(yǎng)瓶中，再加1 ml培養(yǎng)基潤(rùn)洗離心管吸出到培養(yǎng)瓶中，然后用大槍加3ml培養(yǎng)基到培養(yǎng)瓶中（補(bǔ)足5毫升）；八、培養(yǎng)瓶放入37度溫箱。
用多少毫升95%的酒精能配成400毫升75%的酒精？
75%*400毫升=95%*未知數(shù) 未知數(shù)=約316毫升
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