高效液相色譜法和核磁共振譜法的優(yōu)缺點(diǎn)分析
更新時(shí)間：2022-03-09 點(diǎn)擊次數(shù)：2986次
NMR是測(cè)定分子結(jié)構(gòu)的*的方法之一，具有簡單、準(zhǔn)確、專一性高和不破壞樣品等特點(diǎn)。不僅已被用以定量測(cè)定大量的藥理活性藥物，還能區(qū)分及定量測(cè)定一些藥物的立體異構(gòu)體。表明此方法作為一種藥物的定量方法具有簡單易行、結(jié)果準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，還可用做某些沒有對(duì)照品的藥物定量方法的補(bǔ)充。
NMR與HPLC、GC、SFE、SFC、GPC、CE等的聯(lián)用使快速高效分離與強(qiáng)有力結(jié)構(gòu)分析有機(jī)的結(jié)合。而HPLC與NMR的聯(lián)用設(shè)想則早始于20世紀(jì)70年代，80年代初布魯克公司就以其世界的NMR技術(shù)為基礎(chǔ)，首先開發(fā)了LC／NMR技術(shù)。近年來，NMR和色譜法聯(lián)合使用的這一技術(shù)更為成熟，經(jīng)過不斷改進(jìn)和完善，全自動(dòng)操作、常規(guī)使用的HPLC／NMR譜儀已遍及，液相色譜是分離復(fù)雜混合物的最好方法，而NMR是結(jié)構(gòu)分析強(qiáng)有力的工具，兩者聯(lián)用是科學(xué)家們長期以來的愿望。
典型的高效液相色譜與核磁共振聯(lián)用儀。液相色譜包括：HPLC自動(dòng)進(jìn)樣器，HPLC泵，色譜柱和恒溫箱，非NMR檢測(cè)器，如UV(紫外一可見)等。流動(dòng)液從檢測(cè)器進(jìn)入HPLC／NMR接口，接口中附設(shè)了用于中間存儲(chǔ)HPLC峰的環(huán)路(LOOP)，從HPLC／NMR接口出來引至帶流動(dòng)池的NMR探頭或廢液收集器。通過探頭后，流動(dòng)液進(jìn)入餾分收集器回收，并進(jìn)一步用各種NMR技術(shù)對(duì)各色譜峰進(jìn)行研究。在HPLC與NMR接口處的分流器(splitter)上還可連接質(zhì)譜儀，進(jìn)一步成為LC—NMR／MS聯(lián)用儀。
HPLC／NMR的基本操作模式有連續(xù)流動(dòng)模式(on - flow)、停流模式(stop—flow)和峰存貯模式(Peak parking or loop—collection)等三種。這三種模式各有特點(diǎn)，如連續(xù)流動(dòng)模式的優(yōu)點(diǎn)是一次分析可得到所有組分的NMR信息，缺點(diǎn)是所獲得的NMR圖譜質(zhì)量較差；停流模式的優(yōu)點(diǎn)是NMR譜圖質(zhì)量較好，缺點(diǎn)是存在明顯的峰展寬，而且分析時(shí)間較長；峰存貯模式的特點(diǎn)是色譜峰被收集并暫時(shí)貯存到不同的毛細(xì)管回路內(nèi)，由NMR譜儀逐一測(cè)定各流分。實(shí)際操作時(shí)，根據(jù)樣品的特性和檢測(cè)目的，可選擇采用何種操作模式。
采用HPLC／NMR方法可對(duì)雜質(zhì)含量在9％水平的藥物雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，方法簡便、快速、準(zhǔn)確。在藥物雜質(zhì)檢測(cè)中，HPLC／MS測(cè)定和HPLC／NMR測(cè)定都是簡便、快速的方法，但HPLC／NMR聯(lián)用技術(shù)中NMR測(cè)定不受HPLC分離過程中使用的緩沖鹽溶液的限制，并可以提供大量的結(jié)構(gòu)信息。因此，HPLC／NMR聯(lián)用技術(shù)是一種高效、快速獲得混合物中術(shù)知化合物結(jié)構(gòu)信息的技術(shù)，它在藥物研究中的應(yīng)用已日益廣泛。
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